· PolyakrylamidGel musí akrylamidovým monomerem, polymeračním počátečním materiálem, katalyzátorem a pravou směsí soli a pufru dohromady.
· akrylamida bis (n, n '- methylen dvojitý akrylamid) je monomerní forma gelová matrice.
· Amonium persulfát spusťte proces polymerace adhezivního polymerace. Formulace lepidla vyžaduje 10% roztok persulfátu amonného připraveného ve vodě. Většina informací naznačovala potřebu aktivního použití. 10% roztok však může být umístěn při 4 ℃ po dobu několika týdnů bez významné ztráty aktivity. Vytvořte až 10 ml a zlikvidujte, když lepidlo nedokáže agregovat.
Tip: ProcentoakrylamidPři sekvenování lepidla a lepidla proteinu není stejné. Pokud používáte Premade Acrylamid: BIS roztok, ujistěte se, že získáte správnou láhev.
· Temed (n, n, n ', n'- tetramethyl ethylendiamin) je katalyzátor v hnědé láhvi umístěné v chladničce. Přidejte těsně před nalití lepidla.
· Polyakrylamidová elektroforéza použitá sklo v elektroforéze by měla být promyta před a po každém okamžiku. Po elektroforéze omyjte měkkým kartáčem a látkou v horké mýdlové vodě, opláchněte destilovanou vodou a osušte.
· Vlhkost a prach může způsobit dutý polymer. Před elektroforézou vyčistěte skleněnou desku čistič skleněné a otřete ji měkkým kartáčem. Umyjte destilovanou vodou a důkladně osušte otřesem na papíro. Oplachování 70% ethanolu před stíráním papírem pomáhá vyčistit a urychlit sušení. Postupně přidejte vzorky akrylamidu: bis, voda, pufrový roztok, persulfát amonia, templed. Dobře protřepejte a okamžitě nalijte.
Před polymerací není nutné degass polyakrylamidu. (Akrylamid byl umístěn do vakua k odstranění bublin, protože kyslík inhibuje polymeraci.)
Horizontální špičky vzorku lepidla.
· Do spodního krabice vložte kus černého papíru, černé pozadí, abyste vytvořili nějakou díru vzorek, aby viděli jasněji.
· Lepicí nádrž naplněná pufrem, těsně nad koloidem.
· Pokud má okraj světlo, zapněte světla, nechte světlo svítit koloidní. Nakreslete vzorek do pipety.
· Používání automatického pipetovacího zařízení.
· V 10-200 MU 1 může být použito ve většině bodů na vzorku ve většině bodů. U velmi malých vzorkových otvorů (méně než 10 μ1) je dlouhá pipetová hlava používaná pro sekvenční lepidlo pohodlnější.
· Pipetting právě ponořil do vzorku a vdechoval pomalu se pohybující tekutinu. Vzorek se může zdát lepkavý s glycerinem a rychlé čerpání může do hlavy pipety přitáhnout vzduchové bubliny.
· Vzorky po vdechování pipetovací hlavy se pohybují jemně tekutinu na okraji potrubí nebo otřesení papíru sát kapalinové hlavy mimo kapičky. Dávejte pozor, abyste vzorek nestili.
Umístěte vzorek do otvoru vzorku
· Pipetovací zařízení, které udrží malý tlak, vytvořte vzorky mírně přesunuté přepadové kapalné hlavy.
· Pipetovací hlava vložená do vyrovnávací paměti, mírně vyšší než bodové otvory, udržuje kladný tlak. Špička pipety může být vložena do malé díry.
· Pomalu a vytrvale vzorky ven. Špička pipety je umístěna nad otvorem vzorku bodu a vzorek se ponoří do díry. Nechte vzorek klesnout, aby vyplnil díru vzorku místo zatlačení.
· Jakmile se poslední kapka vzorku s tekutou hlavou přesune na druhou nohu, pomalu zvedne tah kapaliny, přesune se z vyrovnávací paměti
Jak udělat vertikální vzorkování lepidla?
· Svislé díry s vertikálním bodem lepidla vytvořené mezi dvěma kusy skla. Ve velmi tenkém lepidlu nelze pipetovou hlavu vložit ani mezi dvě skleněné destičky. Sledujte glycerin! Položte hlavu pipety přes otvor vzorku a vzorek se ponoří do díry.
· Vzorek bodu dříve, ujistěte se, že vzorek vzoru polypropylenu acyl gelu je propláchnut čistý. Odbavte nepolymerovaný akrylamid a voda, která se může objevit na dně otvoru vzorku. Voda může zmenšit otvor vzorku. Použijte stříkačku 25 ml nebo 50 ml a jehlu s 18. Nalijte do elektroforézy a pečlivě propláchněte otvor vzorku.
· Může být obtížné vidět díru vzorku, ale zbytek je snadný. Pokud existují přebytečné otvory, může být vzorkovací vyrovnávací paměť testován bromofenolovou modrou.
Čas příspěvku: Mar-31-2023